蛋白酶,英文名Protease,是水解蛋白質(zhì)肽鏈的一類酶的統(tǒng)稱。蛋白酶的分類方式有很多:根據(jù)它水解多肽的方式,一般分為內(nèi)肽酶和外肽酶,顧名思義,可知內(nèi)肽酶是在蛋白質(zhì)分子的內(nèi)部,將大分子量的多肽切斷成小分子量的朊和胨,外肽酶則則是從外部,也就是在蛋白質(zhì)分子的末端,水解游離的羧基或者氨基上的肽鍵,形成氨基酸,因此外肽酶又有羧基肽酶和氨基肽酶之分;根據(jù)蛋白酶的活性和最佳PH值,則又有天冬氨酸蛋白酶、金屬蛋白酶、巰基蛋白酶和絲氨酸蛋白酶之分;蛋白酶也可以分為酸性,中性和堿性,這是根據(jù)其反應(yīng)的最佳PH值來區(qū)分的。實際上,據(jù)化源網(wǎng)資料,單單不同Cas號的蛋白酶就有60余種。內(nèi)肽酶在工業(yè)上的應(yīng)用最為廣泛。
蛋白酶分布很廣,天然存在于動植物中,微生物中也廣泛存在著蛋白酶,工業(yè)上一般是通過微生物發(fā)酵的方式生產(chǎn)蛋白酶,主要是用細菌(枯草桿菌)及霉菌(棲土曲霉),有時也用酵母及放線菌。蛋白酶種類非常多,而且不同蛋白酶的催化作用選擇性很嚴格,一般一種蛋白質(zhì)酶只作用某些特定的肽鍵。
胃蛋白酶又稱胃酶,一般來源于豬,臨床上主要是用于給缺乏胃蛋白酶的患者補充胃蛋白酶,改善消化不良等相關(guān)癥狀,也可以用于促進人體快速吸收注射藥液,緩解腫痛。
胰蛋白酶可以水解細胞間的蛋白質(zhì),將不同的細胞進行分離,其分離細胞活性的主要因素有溫度、濃度及作用的時間,最佳反應(yīng)溫度是37攝氏度,PH=8.0,所以有時為了避免過度分離,一定要控制相關(guān)反應(yīng)條件。胰蛋白酶在醫(yī)學中同樣有很廣泛的應(yīng)用:胰蛋白酶不僅能夠像消化酶一樣幫助消化,同時還能促進分解濃稠的痰液和血凝塊,稀釋后快速排除體外;胰蛋白酶還可以通過促進傷口肉芽組織的增生,發(fā)揮抗炎效果,加速傷口愈合。實際使用時配置胰蛋白酶溶液時應(yīng)避免選擇含有鈣離子,鎂離子的BSS,確保胰蛋白酶的活性不會被降低。如果需要終止胰蛋白酶的消化作用,可以選擇血清培養(yǎng)液或者使用相應(yīng)的酶抑制劑。另外,由于蛋白酶的強選擇性,所以不同組織對于胰蛋白酶的反應(yīng)強度也是不一樣的,胰蛋白酶并不能對所有組織起效果。
1. 稱取胰蛋白酶:準備PH值7.2的雙蒸水,或者PBS(D-hanks),稱取適量胰蛋白酶,控制濃度為0.25%,攪拌混勻,冷藏過夜,溫度控制在4攝氏度。
2. 抽濾消毒:準備好注射濾器( 0.22 微米微孔濾膜),在超凈臺內(nèi)對胰蛋白酶溶液抽濾消毒,分裝于專用小瓶,冷凍保存,溫度控制在-20攝氏度。
霉菌蛋白酶、細菌蛋白酶和植物蛋白酶則常用于烘培工業(yè),通過分離細胞的方式斷開面筋,形成網(wǎng)狀,增加面筋的彈性,同時通過水解蛋白質(zhì),供給酵母碳源,促進面團的發(fā)酵。