基本信息

常用名 2,7-二氯二氫熒光素二乙酸酯

英文名 H2DCFDA

CAS號 4091-99-0

外觀        白色粉末

2,7-二氯二氫熒光素二乙酸酯生物活性

描述 H2DCFDA是可滲透細(xì)胞，用于檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧 (ROS) 的探針。

體外研究 通過流式細(xì)胞術(shù)分析H2DCFDA探針氧化表明，difESCs中ROS的基礎(chǔ)水平比胚胎干細(xì)胞（ESC）大約6-7倍。 H2DCFDA和DCFDA探針都以其初始形式是非熒光的，但它們在細(xì)胞內(nèi)經(jīng)歷多步轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致熒光產(chǎn)物二氯熒光素（DCF）的形成。這兩種探針之間的唯一區(qū)別是H2DCFDA的轉(zhuǎn)化涉及氧化。因此，與DCFDA探針相關(guān)的熒光相反，H2DCFDA處理的細(xì)胞的熒光取決于細(xì)胞內(nèi)ROS水平。令人驚訝的是，流式細(xì)胞術(shù)分析顯示，ESC和負(fù)載H2DCFDA的difESC的熒光水平之間的差異接近來自DCFDA處理的細(xì)胞的信號之間的差異。后者表明ESCs中氧化H2DCFDA熒光信號低的ROS依賴性原因[1]。

激酶實(shí)驗(yàn) 將H2DCFDA溶解在DMSO中以獲得10mM儲備溶液，并在使用前進(jìn)一步稀釋[1]。 ROS測量[1]為了檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平，使用ROS敏感性探針H2DCFDA。將貼壁細(xì)胞（ESC，difESC，eMSC，HeLa，U118）與PBS中的5μM染色溶液在37℃下在黑暗中孵育30分鐘，然后用0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液收獲，懸浮在新鮮培養(yǎng)基中，并且用流式細(xì)胞儀立即分析。將對照和PHA活化的淋巴細(xì)胞重懸浮于PBS中，與5μMH2DCFDA在黑暗中于37℃溫育30分鐘，并立即分析。如果需要，與H2DCFDA探針一起使用熒光素染料DCFDA的ROS不敏感修飾。染色程序與H2DCFDA [1]相同。

參考文獻(xiàn)

[1]. Lyublinskaya OG, et al. Redox environment in stem and differentiated cells: A quantitative approach. Redox Biol. 2017 Aug;12:758-769.

 2,7-二氯二氫熒光素二乙酸酯物理化學(xué)性質(zhì)

密度 1.5±0.1 g/cm3

沸點(diǎn) 593.5±50.0 °C at 760 mmHg

熔點(diǎn) 209-210oC(lit.)

分子式 C24H16Cl2O7

分子量 487.286

閃點(diǎn) 312.7±30.1 °C

精確質(zhì)量 486.027313

PSA 99.13000

LogP 4.62

蒸汽壓 0.0±1.8 mmHg at 25°C

折射率 1.635

儲存條件

-20℃ 避光，通風(fēng)干燥處，密封保存

穩(wěn)定性

常溫常壓下穩(wěn)定

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